The influence of Toll-like receptor 4 activation in human CD4 T cell function

Tese de mestrado, Ciências Biofarmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019O sistema imunitário dos mamíferos evoluiu de forma a proteger o hospedeiro e eliminar organismos patogénicos enquanto simultaneamente evita uma resposta imune excessiva perante bactérias e organismos comensais. A disrupção do extraordinário equilíbrio dos mecanismos desta resposta resulta frequentemente em inflamação crónica ou doenças autoimunes. Uma melhor compreensão dos mecanismos que regulam a tolerância do sistema imune é então crucial para desenvolver terapias que permitam o controlo de reação exacerbadas em situações de doença autoimune. Os recetores do tipo Toll (TLRs) detetam padrões moleculares característicos de patógenos e contribuem para a rápida iniciação de uma complexa resposta imunitária. Apesar de terem sido intensivamente estudados pela sua expressão em células do sistema inato, estudos recentes mostram que os linfócitos T também expressam estes TLRs e que a sua expressão pode afetar diretamente as funções da célula. Os linfócitos T são um componente chave do sistema imune adaptativo e respondem à presença de patógenos libertando citoquinas que ditam o desfecho da resposta inflamatória. Em particular, resultados anteriores do nosso grupo demonstraram que as células T CD4 humanas expressam TLR4, o recetor que reconhece lipopolissacarídeos (LPS) provenientes de bactérias. No presente trabalho demonstramos que a ativação do TLR4 tem um impacto direto em células T CD4 humanas, sem a interferência de células do sistema inato. A estimulação crónica destas células com condições não-polarizantes do recetor das células T (TCR), juntamente com LPS, levou a um aumento da ativação, sobrevivência e da proliferação das mesmas. Adicionalmente, a mesma estimulação consegue ajudar a redirecionar as células T auxiliares para que estas expressem menores níveis de interferão gama, e maiores níveis das interleucinas 10 e 17. Além disto, também foram isoladas células T CD4 de amostras de fígado humano que expressavam simultaneamente marcadores de residência no tecido e TLR4. Esta observação preliminar pode indicar que as nossas observações anteriores se alarguem ainda a células que residem no tecido. Os nossos resultados apoiam a ideia de que uma ativação consistente do TLR4 em células T CD4, em resposta a bactérias comensais, levam à redirecção das células produtoras de IL-17 para um fenótipo mais tolerante. Esperamos assim que este projeto abra portas a novos estudos que se foquem no papel da ativação direta do TLR em linfócitos T e na sua contribuição para a tolerância no sistema imune.The mammalian immune system has evolved to provide protection from environmental threats, eliminating pathogenic organisms and toxins whilst avoiding an excessive response in the presence of commensal organisms and bacteria. The disruption of this perfectly balanced mechanism of immune responsiveness often results in chronic inflammation and autoimmune disease. A better comprehension of the mechanisms that regulate immune tolerance is thus crucial to develop therapies that allow us to control exacerbated reactions in autoimmune illness. Toll-like receptors (TLRs) detect conserved microbial patterns and largely contribute to the rapid initiation of the highly complex protective mechanism that is the immune response. Despite having been intensively studied for their expression and role in innate immune cells, recent evidence shows that T lymphocytes also express these receptors and that their expression may directly affect cell function. T lymphocytes are a key component of the adaptive arm of the immune system and respond to pathogen encounters by releasing cytokines that dictate the outcome of the inflammatory response. Particularly, previous data from our group has demonstrated that human CD4+ T cells express TLR4, the molecular sensor of bacterial liposaccharide (LPS). In the present work, we provide evidence that the activation of TLR4 has a direct impact in human CD4+ T cells, without interference from innate immune cells. The chronic stimulation of these cells with non-polarizing TCR stimulation and LPS leads to enhanced activation, survival and proliferation. Furthermore, the same stimulation re-directed helper T cells into expressing lower levels of the pro-inflammatory cytokine interferon-gamma, but it increased the production of interleukin (IL) 17 and the immunoregulatory IL-10. Additionally, we isolated CD4+ T cells from human liver samples that simultaneously expressed markers of tissue residency and TLR4, which may broaden these findings to tissue resident T cells. Our results support the view that a consistent activation of TLR4 in CD4+ T cells in response to commensal bacteria leads to re-direction of IL-17-producing cells to a more tolerogenic phenotype. These findings thus pave the way for new studies that focus on the role of direct TLR signaling in T cells and their contribution to immunotolerance.The studies developed in this thesis were performed at CEDOC-NMS/UNL – Centro de Estudos de Doenças Crónicas, NOVA Medical Schoo

Study of ionic contamination in electronic product assembly

Dissertação de mestrado em Chemical Analysis and Characterization TechniquesThe ever-growing demand for better PCB (printed circuit board) performance as well as component miniaturization and increasing density, are all challenges the automotive industry is facing nowadays. However, these alterations in the PCB layout alongside changes in production materials and techniques may jeopardize product reliability. One of the factors that has the ability to threaten PCB functioning is the introduction of ionic contaminants that increase the probability of electrochemical reactions and premature circuit failures. Methods have been created along the years in order to evaluate the presence of these contaminants on printed boards; one of them is the ROSE (Resistivity of Solvent Extract) test. This thesis aimed to study the ionic contamination in electronic product assembly using the CM22 contaminometer, a ROSE test machine. Essentially, this project was divided in two studies. The first one was the study of ROSE machine response and establishment of parameters to test its performance at Bosch Car Multimedia Portugal S.A. The results revealed that although the relation between the machine response and the dissolved contamination was linear, there was some disparity in values of PCBs from the same product family. The temperature and regeneration time of the extraction bath were identified as possible influencers of this discrepancy. Further tests showed temperature is not a significant factor for this behaviour and, at lower contamination levels, the regeneration time has little impact. The second study intended to evaluate the ionic contamination levels of printed circuit boards in 5 different stages of their production run. This research revealed that the ROSE levels of the PCBs obtained from the supplier decrease during the first steps of the process. Solder paste application, component insertion and reflow steps do not introduce much ionic residues on the board surface. Yet, the most important conclusion to this study is that the flux used for rework and selective soldering greatly increases surface contamination presence. In conclusion, the CM22 ROSE contaminometer is suitable to monitor processes in assembly plants. It can detect contamination trends at a process line and can be used as process control tool especially in a no-clean soldering process like the one used in Bosch. For this reason, the evaluation of ionic content should be carried out in different stages of PCBA production since it can be very deceptive to do them only after reflow process as it normally done.A crescente demanda por melhor desempenho de PCBs (placas de circuito impresso), bem como a miniaturização de componentes e o aumento da sua densidade, são desafios que a indústria automóvel enfrenta atualmente. No entanto, as alterações no seu design juntamente com as mudanças nos materiais e técnicas de produção podem comprometer a fiabilidade destas placas. Um dos fatores que tem a capacidade de ameaçar o funcionamento de um PCB é a introdução de contaminantes iónicos capazes de criar falhas elétricas no circuito. Vários métodos foram criados para avaliar a presença destes contaminantes em placas impressas; um deles é o teste ROSE (Resistividade do Extrato Solvente). Esta tese teve como objetivo o estudo da contaminação iónica na montagem de produtos eletrónicos utilizando o contaminometer CM22, um dispositivo de teste ROSE. Para isto, primeiro estudou-se a resposta da máquina ROSE e estabeleceu-se parâmetros para testar o seu desempenho na Bosch Car Multimedia Portugal S.A. Os resultados revelaram que embora a relação entre a resposta do aparelho e a contaminação dissolvida seja linear, existiu alguma disparidade nos valores de placas da mesma família. A temperatura e o tempo de regeneração do banho foram identificados como possíveis influenciadores desta discrepância. Testes adicionais mostraram que a temperatura não influencia este comportamento e, em níveis de contaminação mais baixos, o tempo de regeneração tem pouco impacto. O segundo estudo pretendia avaliar os níveis de contaminação iónica de placas de circuito impresso em 5 fases diferentes da sua montagem. Este estudo permitiu verificar que o PCB obtido do fornecedor possui um nível de ROSE que diminui ao longo dos primeiros passos do processo. As etapas de aplicação da pasta de solda, inserção dos componentes e refluxo não introduzem muitos resíduos à superfície da placa. No entanto, a conclusão mais importante deste estudo é que o fluxo usado para retrabalho e soldadura seletiva aumentam muito a contaminação na superfície das placas. Em conclusão, o contaminometer CM22 é adequado para monitorizar os processos de fabrico. Ele pode detetar tendências de contaminação na linha de produção e pode ser usado como ferramenta de controlo de processo, especialmente num processo sem limpeza como o da Bosch. Por esse motivo, a avaliação do conteúdo iónico deve ser realizada em diferentes etapas da produção de PCBAs, dado que pode ser enganoso fazê-lo somente após o refluxo, como normalmente é

Envolvimento do paciente: desafios, estratégias e limites

Neste capítulo, será abordada a temática do envolvimento do paciente no âmbito da segurança. Ao contrário do que ocorre com outras áreas relacionadas a esse tipo de envolvimento, como a adesão ou a satisfação, o papel do paciente nas questões de segurança tem sido ainda pouco estudado e, apesar de resultados positivos de muitas das ações já implementadas, esse é um assunto que necessita ser refletido e incluído na agenda da investigação/pesquisa científica. Pretendendo abordar as questões principais do envolvimento do paciente em matérias de segurança, o capítulo integra, após a introdução ao tema, um ponto sobre a perspetiva do paciente, referindo-se aí às áreas e tarefas de envolvimento, os determinantes e os limites do envolvimento; o segundo ponto sobre a perspetiva do profissional de saúde, quando se fala sobre o modelo subjacente ao envolvimento do paciente, os desafios, benefícios e limitações dos profissionais; e o terceiro ponto que se centra nas estratégias de promoção do envolvimento

Mammography: psychological experience, and radiographer’s attitudes and behaviors that promote women’s cooperation

RESUMO: A mamografia é o método de diagnóstico mais eficaz para deteção precoce de carcinoma da mama. A realização periódica deste exame tem vindo a ser associada a melhores prognósticos como deteção da doença em fases mais precoces e redução de mortalidade. Contudo, a mamografia não é encarada como mais um exame complementar de diagnóstico e constitui, para a maioria das mulheres, uma situação de ameaça. Na verdade, muitas mulheres referem ter experienciado ansiedade, dor ou desconforto durante a realização deste procedimento. Por outro lado, uma percentagem elevada de mulheres falha na realização periódica de mamografias. Este artigo pretende abordar as reações psicológicas associadas ao exame de mamografia e enfatizar a forma como os técnicos de radiologia podem melhorar o atendimento das mulheres que realizam este exame. O papel do técnico de radiologia no fornecimento de informação antes do exame, na criação de uma atmosfera agradável e empática e na utilização de estratégias de confronto para redução de dor e desconforto e na promoção do controlo e autonomia da paciente são alguns dos aspetos abordados.ABSTRACT: Mammography is the most effective method available for early detection for breast cancer. Routine screening is being associated with better prognostic, such as, earlier stage disease and mortality reduction. However, mammography is not seen by most women as a more diagnostic test, and many women report having experienced some anxiety, pain and discomfort during breast screening process. Similarly, a high percentage of women failed to conduct regular mammography screening. This article examined the psychological reactions associated with mammography examination and emphasised how radiographers can improve the situation of women attending the breast screening. Radiographer’s intervention such as provision of information before screening, friendly screening atmosphere and empathetic and coping strategies to reduce pain and discomfort and improve power and autonomy in during mammography are also addressed

Exames de ressonância magnética em utentes claustrofóbicos: identificação de estratégias facilitadoras

A claustrofobia definida como o medo de permanecer em espaços fechados provoca, devido às características físicas da maioria dos equipamentos, um enorme desconforto àqueles que necessitam de realizar exames de Ressonância Magnética (RM). Até 37% dos utentes que realizam exames de RM podem experienciar moderados a elevados níveis de ansiedade, sendo que 5 a 10% destes não o consegue concluir devido à claustrofobia, contribuindo assim para o insucesso do exame e inerentes consequências para o diagnóstico e/ou seguimento clínico. Objectivo do estudo - Contribuir para maximizar a taxa de sucesso de exames de RM em utentes claustrofóbicos

Speech sounds data for typically developing european portuguese children 6-9 years old

Purposes: To identify the European Portuguese (EP) speech sounds competence in children. Methods: A total of 240 children between 6 and 9;11 years old named 37 pictures. Gender and age effect as well as the age limit for EP speech sound mastery were analyzed. The percentage of consonants correct (PCC) were determined. The criteria used were PCC ≥75% (acquired sound) and ≥90% (mastered sound). Results: No gender effect for speech sound development was found in the studied age range. Children with older ages [8-9;11] showed a slightly significant mean performance than younger ages [6-7;11]. The girls appeared to reach higher mean competence than boys; however, gender effect did not reach significance. At the [6-6;11] years old age range all plosives (except the word-medial /t/ and /g/), four fricatives (/f/, /v/, word-initial /ʃ/ and word-medial /Ʒ/) and two laterals (word-medial /r/ and word-initial and medial /R/) are mastered. The other targeted sounds are mastered either at the [7-7;11] or at the [8-8;11] year old range. Conclusion: The EP targeted speech sounds are mastered between 6 and 8;11 years old.N/

Development and implementation of new protocols for antibody purification

Com uma sociedade em constante desenvolvimento e crescimento, o ser humano procura novos meios para prolongar o seu tempo de vida. Como tal, e com o objectivo de alcançar a manutenção da saúde pública, é necessário desenvolver e prescrever terapias correctas, sendo imprescindível possuir testes de diagnóstico céleres e com limites de detecção eficazes, que veiculem uma informação fidedigna ao clínico. Assim, os anticorpos, como biomolécula que apresenta uma elevada afinidade para o antigénio, são um ponto de interesse para aplicações tanto a nível terapêutico como para testes de diagnóstico. Após a sua produção, recorrendo a tecnologia recombinante, o processo de recuperação das imunoglobulinas (Igs) envolve vários passos de filtração, inactivação viral, bem como a aplicação de diversas técnicas cromatográficas. O produto é assim submetido a várias técnicas, correndo o risco de haver a introdução de novos contaminantes e perdas durante o processo de manipulação do mesmo. Deste modo, torna-se essencial investigar, desenvolver e optimizar processos de produção, fragmentação, purificação e redução de anticorpos, que permitam uma recuperação do produto mantendo as suas características morfológicas e funcionais, a um custo aceitável. Este projecto tem como objectivo, estudar novos métodos de purificação de diferentes anticorpos e fragmentos de anticorpos para posterior utilização em testes de diagnóstico. Recorrendo à técnica de cromatografia de exclusão molecular, pretende-se purificar os fragmentos de ligação ao anticorpo F(ab)’2 e F(ab)’, que posteriormente serão imobilizados na superfície do biosensor.With a society in constant development and grow, the human being search for new ways to prolong their half life time. As such, and with the goal to achieve the maintenance of the public health, is necessary to develop and prescribe correct treatments, being indispensable hold fast tests of diagnosis with a efficient limit of detection, that convey a reliable information to the clinic. So, the antibodies, as a biomolecule which presents a high affinity to the antigen, constitute a point of interest to therapeutic and diagnosis applications. Behind the production, which resorts to recombinant technology, the process of recovery of immunoglobulin’s (Igs) involves several filtration steps, viral inactivation, as well as the application of multiple chromatography techniques. The product is therefore subject to several techniques and the risk of the introduction new contaminants and product loss during the manipulation increases. Thus, becomes essential to explore, to develop and to optimize the processes of production, fragmentation, purification and reduction of antibodies, that allow a product recovery that keep the morphologic and functional characteristics of the product, in a acceptable cost. This project has as goal, the study of new purification methods to different antibodies, and antibody fragments to ulterior application in diagnosis test. Using exclusion molecular chromatography, we intended to purify the fragments of antigen binding F(ab)’2 and F(ab)’, for ulterior immobilization over the biosensor surface

Public information on medication safety: sources, perceived reliability and the influence of educational level

Background: WHO declared medication safety (MS) a patient safety global concern, placing patient engagement as the centerpiece. Most health psychology models enhance beliefs' influence on health behaviors, being an information-processing determinant of health beliefs. This process it’s influenced by meanings given to information and its sources. Aims: To identify the main information sources about MS, focusing on the Portuguese medicine agency (INFARMED), and assess their perceived reliability and efficacy in transmitting information to the public, considering educational level. Methodology: Data was collected using a convenience sample of 782 participants, who completed a questionnaire assessing sociodemographic data and perceptions about public information on MS. Study was approved by University Ethics Committee. Results: Pharmacies, doctors, INFARMED and Google represent the top-4 sources of information. Only Google is perceived as non-reliable. 7.7% of the participants never heard about INFARMED, with lower frequencies in higher educational levels (p=0.007). The majority of participants consider INFARMED a reliable source and effective in transmitting information about MS, but its perceived efficacy reduces with increased education levels (p<0.001). The same for the impact of more information in raising confidence in medicines (p=0.05). Stop taking the medicine and searching for more information are the most commonly reported consequences of receiving information about a MS problem, with higher frequencies on the lowest education level (p<0.001). Conclusion: Public sources of information are well known and seen as credible, though educated participants seem to be more demanding of the quality and reliability of the information.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

What people think about medicines and its prescription by doctors: a study in Portugal

Despite the general recognition of the benefits of adherence to medical regimes, it has been estimated that 50% of medicines prescribed for long-term illness are not taken as recommended. Adherence is a multidetermined process. The Extended Common‐Sense Model proposes the inclusion of beliefs about medicines as mediators between illness representations and adherence. Stronger beliefs about medicines and their harmful effects have been associated with higher levels of nonadherence. Objective: Explore general beliefs about medicines, and their recommendation by doctors among the Portuguese general population (age > 18 years) who use community pharmacy. Methodology: The two subscales, “general overuse” and general harm”, of the “The Beliefs about Medicines Questionnaire” (BMQ) and a sociodemographic questionnaire were used. IBM SPSS 26 software was used for statistical analysis. Results: A total of 847 Portuguese adults participated, 331 (39,1%) were 25-44 years of age; 427 (50,4%) concluded secondary education, and 198 (23,4%) reported having a chronic condition. The majority of participants endorse the belief that most medicines are addictive, and a large percentage agreed that they are toxic, that doctors overprescribed and could benefit from hearing patients; and that natural remedies are safer than medicines. Differences were found considering age (p=0,093), sex(p=0,08), and having active working (p=0,045) with stronger beliefs in young adults and adults, in males and no active workers. No differences were found considering the presence/absence of chronic disease". These results are discussed considering their possible contribution to the promotion of adherence through better communication with doctors, nurses, and pharmacists.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Avaliação da centração no doente em estudantes de enfermagem e enfermeiros portugueses

Introdução: A abordagem centrada no doente tem sido valorizada no meio académico e profissional; contudo, parecem existir dificuldades em aplicá-la à prática clínica. Estudos mostram que os cuidados prestados pelos enfermeiros são sobretudo instrumentais, baseando as suas ações em necessidades inferidas e não confirmadas pelos doentes. Esta realidade pode estar relacionada com o tipo de metodologias de ensino usadas nos treinos comunicacionais ou com barreiras pessoais e profissionais percebidas pelos profissionais. Objetivos: O objetivo principal deste estudo é avaliar o tipo de orientação assumida por enfermeiros e estudantes de enfermagem na prestação de cuidados de saúde ao doente. Pretende-se também estudar se existem diferenças: a) entre sexos, b) em função do ano de escolaridade dos estudantes, c) entre estudantes e profissionais de saúde